El medio condicionado (CM) es una mezcla compleja de proteínas, lípidos, ácidos nucleicos y vesículas extracelulares producidas naturalmente por las células. Tiene un potencial prometedor para aplicaciones médicas, pero mantener una calidad consistente entre lotes es esencial para garantizar una seguridad y eficacia confiables. Este estudio examinó el impacto de congelar CM recién recolectado a -80 grados C, un paso común en las cadenas de producción más grandes, en comparación con procesarlo inmediatamente después de la recolección. Los resultados mostraron que la congelación causó una reducción del 34% en el contenido total de proteínas, una disminución en la proporción de vesículas más grandes y cambios en las huellas espectrales y composicionales. Estos hallazgos subrayan los efectos significativos que los pasos de fabricación rutinarios, como la congelación, pueden tener en la composición del CM. La sensibilidad de las moléculas biológicas a los cambios de temperatura, que pueden interrumpir su organización estructural, probablemente explica estos cambios. Abordar tal variabilidad es crucial para desarrollar aplicaciones basadas en CM consistentes y efectivas.