Los caballitos de mar son cada vez más considerados como un objeto de cultivo prometedor adecuado para sistemas de acuicultura en recirculación (RAS) debido a su alto valor económico. Sin embargo, los informes sobre el cultivo a gran escala de caballitos de mar en RAS son raros, y algunos parámetros clave, como las densidades de siembra, aún no están claros. En el presente estudio, empleamos el caballito de mar de línea, para el cual se ha logrado el cultivo a gran escala, para determinar la densidad de siembra adecuada para tres juveniles de diferentes tamaños en RAS. Los tres juveniles de diferentes tamaños tenían alturas corporales de 4.0, 7.0 y 9.0 cm, y sus gradientes de densidad de prueba fueron 1.0, 0.8, 0.6 y 0.4 inds/L; 0.6, 0.5, 0.4 y 0.3 inds/L; y 0.4, 0.3, 0.2 y 0.1 inds/L, respectivamente. Los juveniles fueron cultivados durante un mes, y luego se analizaron su supervivencia, crecimiento y los contenidos de cortisol en plasma y serotonina en el cerebro (dos indicadores relacionados con el estrés). Los resultados muestran que, independientemente del tamaño de los juveniles, una alta densidad puede inhibir el crecimiento y desencadenar respuestas de estrés. Además, para los juveniles de tamaño pequeño (4.0 cm) y mediano (7.0 cm), una alta densidad también puede exacerbar la heterogeneidad de tamaño y causar muerte. Teniendo en cuenta el bienestar y la producción de los caballitos de mar cultivados, el presente estudio sugiere que las densidades de siembra adecuadas para juveniles de 4.0, 7.0 y 9.0 cm en RAS son 0.6, 0.4 y 0.2 inds/L, respectivamente.