L. es un cultivo de valor medicinal y económico significativo, ampliamente utilizado en los campos de la fibra, la alimentación y la medicina. Con la creciente demanda de productos de cannabis medicinal, la producción de plántulas sanas, uniformes y libres de enfermedades se ha vuelto cada vez más importante. Sin embargo, los métodos convencionales de micropropagación a menudo enfrentan desafíos, como el crecimiento lento, las bajas tasas de enraizamiento y la susceptibilidad a la contaminación, lo que limita su idoneidad para el cultivo a gran escala. En este estudio, empleamos micropropagación fotoautotrófica en condiciones asépticas y libres de azúcar, regulando la intensidad de la luz LED y el fotoperíodo para promover el crecimiento y enraizamiento de plántulas de cannabis. Nuestros resultados demuestran que una intensidad de luz de 100-150 umol m s combinada con un fotoperíodo de 20 h d promovió significativamente la elongación de raíces, aumentó el desarrollo de hojas y mejoró la calidad general de las plántulas. En contraste, la iluminación continua y las intensidades de luz excesivamente altas inducen respuestas de estrés lumínico, afectando negativamente el crecimiento de las plántulas. Así, este estudio proporciona apoyo de datos para optimizar el entorno lumínico en la micropropagación fotoautotrófica de plántulas de cannabis estériles y de alta calidad, facilitando así la aplicación más amplia del cannabis en los campos médico y farmacéutico.