El lisado de plaquetas humanas (hPL) tiene altos niveles de fibrinógeno y factores de coagulación, lo que puede llevar a la formación de geles y precipitados durante el almacenamiento y la cultura celular. La heparina derivada de animales se añade comúnmente para minimizar estos riesgos, pero no puede eliminarlos por completo. Así, este estudio propone un método alternativo para preparar hPL con fibrinógeno reducido (Fd-hPL) que soporte la expansión de células madre mesenquimatosas (MSCs) sin heparina. Se añadió hPL a heparina para preparar heparina-hPL (H-hPL), mientras que Fd-hPL se preparó añadiendo sal de calcio a hPL para eliminar el coágulo de fibrina. Se compararon las concentraciones de calcio, fibrinógeno y factores de crecimiento en H-hPL y Fd-hPL. Se evaluaron los efectos de H-hPL y Fd-hPL en MSCs derivados del cordón umbilical (UC-MSCs). Los resultados mostraron que Fd-hPL poseía una concentración de calcio significativamente más alta y un nivel de fibrinógeno más bajo que H-hPL. Las concentraciones de BDNF, TGF-beta1 y PDGF-BB no mostraron diferencias significativas entre H-hPL y Fd-hPL, pero Fd-hPL tenía una concentración de VEGF más baja. Fd-hPL retuvo las características de UC-MSCs, ya que no afectó la viabilidad celular, la proliferación, el potencial de diferenciación multilinaje ni la expresión de marcadores de superficie. En conclusión, Fd-hPL apoyó efectivamente la expansión in vitro de MSCs sin comprometer sus características, posicionándolo como un posible sustituto del suero fetal bovino (FBS) en la cultura de MSC.