Tratamiento de muestra con tripsina para el diagnóstico de COVID-19 mediante RT-LAMP
Autores: García-Sorribes, Soraya; Lara-Hernández, Francisco; Manzano-Blasco, Iris; Abadía-Otero, Jessica; Albert, Eliseo; Mulet, Alba; Briongos-Figuero, Laisa Socorro; Gabella-Martín, Miriam; Torres, Ignacio; Signes-Costa, Jaime; Navarro, David; Martín-Escudero, Juan-Carlos; García-García, Ana-Bárbara; Chaves, Felipe Javier
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 8
Citaciones: Sin citaciones
El coronavirus SARS-CoV-2 es responsable de la pandemia de COVID-19, lo que ha resultado en una emergencia de salud global. Dada su rápida propagación y el alto número de individuos infectados, era esencial contar con una herramienta de diagnóstico para una detección rápida, simple y rentable. En este trabajo, desarrollamos una prueba de diagnóstico de COVID-19 que incorpora un control interno humano, basada en la Amplificación Isotérmica Mediadas por Transcripción Inversa (RT-LAMP). Al trabajar con ARN sintético de SARS-CoV-2, el ensayo RT-LAMP optimizado tiene una sensibilidad de 10 copias virales y puede ser detectado por fluorescencia en menos de 15 minutos o a simple vista en 25 minutos utilizando RT-LAMP colorimétrico. Para evitar el paso de extracción de ARN, se optimizó un pretratamiento de la muestra. Posteriormente, se realizó una validación en 268 muestras tratadas con tripsina (incluyendo exudados nasofaríngeos, bucales y nasales) y amplificadas con RT-LAMP colorimétrico para evaluar su sensibilidad y especificidad en comparación con RT-qPCR de muestras extraídas. Los resultados de la validación mostraron una sensibilidad y especificidad del 100% para muestras con Ct.
Descripción
El coronavirus SARS-CoV-2 es responsable de la pandemia de COVID-19, lo que ha resultado en una emergencia de salud global. Dada su rápida propagación y el alto número de individuos infectados, era esencial contar con una herramienta de diagnóstico para una detección rápida, simple y rentable. En este trabajo, desarrollamos una prueba de diagnóstico de COVID-19 que incorpora un control interno humano, basada en la Amplificación Isotérmica Mediadas por Transcripción Inversa (RT-LAMP). Al trabajar con ARN sintético de SARS-CoV-2, el ensayo RT-LAMP optimizado tiene una sensibilidad de 10 copias virales y puede ser detectado por fluorescencia en menos de 15 minutos o a simple vista en 25 minutos utilizando RT-LAMP colorimétrico. Para evitar el paso de extracción de ARN, se optimizó un pretratamiento de la muestra. Posteriormente, se realizó una validación en 268 muestras tratadas con tripsina (incluyendo exudados nasofaríngeos, bucales y nasales) y amplificadas con RT-LAMP colorimétrico para evaluar su sensibilidad y especificidad en comparación con RT-qPCR de muestras extraídas. Los resultados de la validación mostraron una sensibilidad y especificidad del 100% para muestras con Ct.