Resumen

Para el etiquetado y la modificación de ARN en sitios específicos mediante la expansión del alfabeto genético, desarrollamos un sistema de PCR y transcripción que utiliza dos pares de bases hidrofóbicas no naturales: 7-(2-tienil)-imidazo[4,5-b]piridina (Ds) y 2-nitro-4-propinilpirrol (Px) como tercer par para la amplificación por PCR y Ds y pirrol-2-carbaldehído (Pa) para la incorporación de componentes funcionales como bases Pa modificadas en ARN mediante transcripción T7. Para preparar plantillas de ADN que contuvieran Ds con cadenas largas, se utilizó el par Ds-Px en un método de PCR de fusión, mediante el cual demostramos la síntesis de plantillas de ADN de 282 pb que contenían Ds en posiciones específicas. Utilizando estas plantillas de ADN con Ds y un sustrato Pa ligado a biotina (Biotin-PaTP) como base Pa modificada, se generaron transcritos de ARN de 260-mer que contenían Biotin-Pa en una posición específica mediante la ARN polimerasa T7. Este sistema de dos pares de bases no naturales, que combina los pares Ds-Px y Ds-Pa con sustratos Pa modificados, proporciona una potente herramienta para el etiquetado y la modificación específicos de posiciones deseadas en grandes moléculas de ARN.

• Materias:Genética molecular Ácido ribonucleico (ARN) Genómica Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Ácidos nucleicos
• Subjects:Molecular genetics Ribonucleic acid (RNA) Genomics Polymerase chain reaction Nucleic acids
• Palabras claves:plantillas de adn, etiquetado específico, pares de bases hidrofóbicas no naturales, polimerasa de adn t7, plantillas de adn pb, método pcr de fusión, expansión del alfabeto genético, moléculas grandes de adn, transcritos de adn mer, base pa modificada
• Keywords:dna templates, specific labeling, hydrophobic unnatural base pairs, t7 rna polymerase, bp dna templates, fusion pcr method, genetic alphabet expansion, large rna molecules, mer rna transcripts, modified pa base