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Development of Au-Nanoprobes Combined with Loop-Mediated Isothermal Amplification for Detection of Isoniazid Resistance in Mycobacterium tuberculosisDesarrollo de nanosondas de Au combinadas con amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección de la resistencia a la isoniazida en Mycobacterium tuberculosis

Resumen

La tuberculosis multirresistente (TB-MDR) es la tuberculosis por Mycobacterium que no responde a la isoniazida y la rifampicina, por lo que la afección empeora continuamente y crea dificultades para el tratamiento por parte de los programas de control de la sanidad pública, especialmente en los países en desarrollo. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real combinada con la electroforesis en gel de agarosa o las pruebas en tira son herramientas moleculares útiles para el diagnóstico de la TB-MDR. La novedosa amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) también puede detectar la resistencia a fármacos, que es una mutación puntual, mediante el diseño de cebadores internos de extremo 5′ específicos con el mutante. Al hibridar con productos de LAMP que contienen secuencias específicas de la diana, las nanosondas de Au permanecen rojas, mientras que las muestras de ensayo sin secuencias específicas en la sonda se vuelven púrpuras debido a la agregación inducida por la sal de las nanosondas de Au. En este estudio, se diseñó una estrategia basada en el LAMP de una muestra de ADN acoplada a Au-nanosondas específicas, que mostró el potencial de proporcionar un método rápido y sensible para detectar la resistencia a la isoniazida en la posición 315 (G→C) del gen katG. Se analizaron 46 muestras clínicas y mostraron una especificidad y sensibilidad del 100% en comparación con Genotype® MDR-TB Plus. Este método resultó ventajoso porque es rápido, barato, específico y sensible. Además, no requiere ciclos térmicos para la detección de MDR-TB.

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