Resumen

En este estudio se utilizaron métodos microbiológicos clásicos para la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM) de Candida albicans (cepas NCTC-885-653 y ATCC-10231) cultivadas a largo plazo en presencia del agente antifúngico fluconazol (FLC). Se ha desarrollado un método sencillo y sensible basado en la cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa (RP-HPLC) para la determinación de la concentración intracelular de FLC en C. albicans utilizando tinidazol como estándar interno. Tras la extracción con diclorometano, la separación cromatográfica se logró en una columna Machery-Nagel EC250/2 Nucleodur-100-3 C18 mediante elución en gradiente utilizando la fase móvil compuesta por (A) tampón de acetato de amonio 0,01 M, pH = 5,00, y (B) acetonitrilo. Se determinaron diferentes parámetros de rendimiento analítico, como la linealidad, la precisión, la exactitud, el límite de cuantificación (LOQ) y la robustez, de acuerdo con las directrices del US DHHS FDA y la EMEA. El método fue lineal para FLC ( r = 0,9999 ) en un rango de 100 a 10000 ng/mL. Las precisiones intradiaria e interdiaria (desviación estándar relativa) estuvieron dentro del 2,79 y 2,64%, respectivamente, y la exactitud (error relativo) fue inferior al 2,82%. La recuperación de la extracción osciló entre el 79,3 y el 85,5%. El método fiable se aplicó con éxito al estudio de la resistencia a los azoles de C. albicans y se demostró que la concentración intracelular de FLC se correlacionaba con el perfil de susceptibilidad a los fármacos de la levadura y con los valores de MIC.

• Materias:Análisis cromatográfico Química farmacéutica Análisis químico Método espectrofotométrico
• Subjects:Chromatographic analysis Chemistry pharmaceutical Chemical test Spectrophotometric method
• Palabras claves:concentración intracelular, determinación de flc, desviación estándar relativa, concentración de flc, límite de cuantificación, agente antifúngico fluconazol, perfil de susceptibilidad al fármaco, presencia de antifúngicos, métodos microbiológicos clásicos, concentración mínima inhibitoria
• Keywords:intracellular concentration, determination of flc, relative standard deviation, concentration of flc, limit of quantification, antifungal agent fluconazole, drug susceptibility profile, presence of antifungal, classical microbiological methods, minimal inhibitory concentration