Resumen

El dinucleótido de adenina y nicotinamida fosfato (NADP) es una biomolécula esencial que participa en la homeostasis redox y en la síntesis de compuestos de señalización. La única enzima capaz de sintetizar NADP es la NAD Quinasa (NADK, EC 2.7.1.23/2.7.1.86). Así, en este estudio se presenta un acercamiento al metabolismo del NADP en el parásito Giardia intestinalis, agente etiológico de la giardiasis, una enfermedad de alta prevalencia en América, África y Asia. Mediante herramientas bioinformáticas se identificó un candidato a NADK, cuya predicción a nivel de estructura terciaria mostró motivos característicos y universales de NADKs previamente caracterizadas. La proteína recombinante correspondiente (His-GINADK) se expresó en Escherichia coli BL21 (DE3) y se purificó parcialmente mediante cromatografía de afinidad a níquel. La síntesis de NADP por parte de la proteína His-GINADK se comprobó mediante ensayos enzimáticos evaluados por RP-HPLC. Adicionalmente, se determinó una localización subcelular citosólica en trofozoítos del parásito, empleando inmunofluorescencia indirecta y anticuerpos policlonales producidos en modelos murinos inmunizados con la proteína His-GINADK purificada a partir de cuerpos de inclusión. Los resultados obtenidos representan un avance en el entendimiento del metabolismo del NADP y de la importancia fisiológica de la NADK en el modelo de Giardia.

Introducción

Giardia intestinalis (G. lamblia o G. duodenalis) es un parásito gastrointestinal de gran importancia médica y veterinaria que afecta al ser humano y a varios mamíferos [1].  La enfermedad causada por el parásito se conoce como giardiasis, con aproximadamente 200 millones de casos humanos en todo el mundo [1], [2]. Aunque esta enfermedad se ha tratado con compuestos nitroheterocíclicos y benzimidazoles, la eficacia de estos fármacos no es del 100%. Además, en las últimas décadas se han notificado casos de reinfección recurrente y resistencia a los fármacos [3]-[6]. En consecuencia, el estudio y la caracterización de las vías metabólicas y las enzimas esenciales relacionadas con la supervivencia y la proliferación de G. intestinalis son imperativos en la búsqueda de nuevas dianas terapéuticas que permitan un control eficaz de la enfermedad.

Además de su importancia clínica, G. intestinalis se considera un valioso modelo celular. El análisis de las secuencias de ARN ribosómico y de las proteínas conservadas ha permitido su clasificación como uno de los primeros eucariotas divergentes [1], [7]. La disponibilidad de la secuencia completa de su genoma y el hecho de que todo su ciclo vital pueda ser reproducido in vitro hacen de este parásito un modelo ideal para estudiar diferentes procesos celulares [1], [8], [9]. Uno de estos procesos corresponde a la biosíntesis del dinucleótido de nicotinamida adenina NAD(H) y su forma fosforilada NADP(H). 

• Materias:Protozoos Proteínas Parásitos Biomoléculas
• Subjects:Protozoa Proteins Parasites Biomolecules
• Palabras claves:Localización citosólica; Síntesis de NADP; Proteína recombinante
• Keywords:Localización citosólica; Síntesis de NADP; Proteína recombinante