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Rapid Identification and Simultaneous Quantification of Aristolochic Acids by HPLC-DAD and Confirmations by MS in Aristolochia chilensis Using a Limited BiomassIdentificación rápida y cuantificación simultánea de ácidos aristolóquicos mediante HPLC-DAD y confirmaciones por EM en Aristolochia chilensis utilizando una biomasa limitada

Resumen

Se identificaron seis ácidos aristolóquicos en la especie chilena Aristolochia chilensis mediante cromatografía líquida de alto rendimiento acoplada a un detector de matriz de diodos (HPLC-DAD) y posterior confirmación con espectrometría de masas (EM). Las fracciones de cada señal fueron recogidas e inyectadas directamente en un detector de masas Orbitrap modelo Q Exactive Focus (Thermo Scientific). La extracción de ácidos se realizó con 0,10-0,50 g de muestra liofilizada y pulverizada y se concentró en un equipo de extracción Soxhlet. Las separaciones líquido-líquido y una posterior extracción en fase sólida (SPE) C18 se realizaron utilizando 100 µL del extracto que contiene los ácidos aristolóquicos presentes en la planta Aristolochia chilensis. Las condiciones de HPLC utilizaron una sola fase móvil acetonitrilo : agua (1 : 1) acidificada con 0.1 ácido cético y una elución isocrática a 1 mL-min-1. Se utilizó la columna InertSustain C18 de 250 × 4,6 mm y 3 µm, el volumen de inyección fue de 20 µl y el tiempo de ejecución se redujo a 15 min. Se construyeron curvas de calibración con r2 de 0,9997. El límite de cuantificación para AAI fue de 0,138 ± 0,010 µg/mL, y para AAII, de 0,558 ± 0,042 µg/mL.

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