Resumen

La leishmaniasis humana, considerada una enfermedad parasitaria tropical desatendida, se presenta en tres formas clínicas principales (es decir, leishmaniasis cutánea (LC), leishmaniasis mucocutánea (LMC) y leishmaniasis visceral (LV)) que están determinadas principalmente por su especie causante. Leishmania donovani, el parásito más virulento y visceralizante, es cada vez más conocido como causante de la LC en muchos países del mundo. Aunque generalmente se considera que la CL no evoca una respuesta inmunitaria humoral, salvo una respuesta no robusta y variable en una minoría de casos, la LV se asocia a una respuesta humoral claramente fuerte. Sin embargo, la respuesta humoral en la CL inducida por L. donovani no ha sido bien evaluada hasta ahora. Un ensayo adecuado basado en la serología es un paso primario esencial en dicho estudio. Se diseñó y optimizó un ensayo inmunoenzimático indirecto (ELISA) basado en el antígeno crudo (Ag) de promastigotes de Leishmania para utilizarlo en estudios serológicos posteriores sobre esta nueva entidad clínica. La optimización incluyó la cuantificación del Ag crudo, el método de titulación en tablero para determinar las concentraciones óptimas para el recubrimiento del Ag, sueros humanos y anticuerpos secundarios (Ab) con un tampón de recubrimiento adecuado, un tampón de bloqueo y las temperaturas de incubación. El tampón de recubrimiento seleccionado fue tampón fosfato 0,02 M, pH 6,8, y el tampón de bloqueo fue suero bovino 2etal con solución salina tamponada con fosfato 0,01 M. Se necesitó al menos 1 μg de Ag crudo para recubrir la placa ELISA, mientras que se utilizó 1 :1000 de suero se utilizó como Ab primario. La concentración optimizada del Ab secundario fue de 1 : 64000, que podría modificarse según las recomendaciones del fabricante. La especificidad del ensayo se evaluó previamente utilizando sueros (n = 20 de cada categoría) de pacientes con CL confirmada y controles (otras enfermedades de la piel que imitan la CL, otras enfermedades sistémicas que imitan la LV, controles sanos no endémicos y controles sanos endémicos). Este procedimiento describe un procedimiento de optimización de una técnica ELISA para la detección de anticuerpos anti-Leishmania en pacientes con CL causada por L. donovani.

• Materias:Análisis cromatográfico Nanopartículas Química farmacéutica Análisis químico Método espectrofotométrico
• Subjects:Chromatographic analysis Nanoparticles Chemistry pharmaceutical Chemical test Spectrophotometric method
• Palabras claves:ag crudo, cl, tampón de recubrimiento adecuado, suero bovino fetal, métodos de valoración en tablero de ajedrez, enfermedad parasitaria presente, respuesta inmunitaria humoral, respuesta humoral fuerte, nueva entidad clínica, paso primario esencial
• Keywords:crude ag, cl, suitable coating buffer, fetal bovine serum, checkerboard titration methods, parasitic disease present, humoral immune response, strong humoral response, new clinical entity, essential primary step