La subcultura a largo plazo del callo embriogénico conduce a una disminución en la embriogénesis somática y la capacidad de germinación, lo que puede estar asociado con niveles aumentados de metilación. La 5-Azacitidina (5-AzaC), un inhibidor de la metilación, modula la metilación del ADN y está ampliamente involucrada en la regulación del crecimiento, desarrollo y metabolismo de las plantas. Para investigar el efecto de la 5-AzaC en la embriogénesis somática y la germinación, suplementamos el medio de proliferación con diferentes concentraciones de 5-AzaC. Los resultados mostraron que la adición de 5-AzaC inhibió la proliferación del callo embriogénico, con la proliferación de la línea embriogénica N2 completamente inhibida a 100 M, mientras que la de la línea embriogénica N4 cesó a 20 M. En contraste, el tratamiento con 10 M y 20 M de 5-AzaC aumentó significativamente el rendimiento de embriones somáticos en ambas líneas embriogénicas, con el rendimiento máximo observado a 20 M para la línea embriogénica N2 y a 10 M para la línea embriogénica N4. Además, la adición de 10 M de 5-AzaC redujo efectivamente la tasa de deformidad durante la germinación de embriones somáticos en las líneas embriogénicas N2 y N4, en un 15.91% y 13.53%, respectivamente. Estos hallazgos demuestran que la 5-AzaC puede restaurar parcialmente el potencial de embriogénesis somática del callo embriogénico bajo subcultivo a largo plazo. Además, estos resultados sugieren que sus efectos pueden ser tanto dependientes de la concentración como específicos del genotipo. Los resultados proporcionan un enfoque potencial para mitigar la disminución de la competencia embriogénica, al tiempo que demuestran un potencial significativo para la propagación a gran escala.