Se realizaron análisis citogenéticos en dos especies de Curimatidae (Steindachnerina insculpta y Cyphocharax modesta) de los ríos Paranapanema y Tietê (estado de São Paulo, Brasil), mostrando un cariotipo compuesto por 54 cromosomas metasubmetacéntricos en ambas especies. La tinción con plata y cromomicina, así como la hibridación in situ fluorescente (FISH) con una sonda de ADNr 18S, indicaron que las regiones organizadoras nucleolares (NOR) de ambas especies se localizan en la región terminal del brazo largo de dos cromosomas metacéntricos. Si bien se evidenció un único sistema NOR en ambas especies analizadas, S. insculpta y C. modesta presentaron las regiones organizadoras nucleolares en pares de cromosomas distintos, lo que indica que estos cistrones pueden considerarse marcadores citogenéticos. También se pudo detectar variación en la cantidad y distribución de la heterocromatina constitutiva (bandas C) entre las dos especies. Si bien S. insculpta presentó pocos bloques heterocromáticos, en C. modesta se observaron bandas C intensamente teñidas, especialmente en la región terminal del brazo largo de los cromosomas portadores de NOR. Si bien la mayoría de las especies de Curimatidae se han caracterizado por cariotipos homogéneos, es posible que se establezcan poblaciones aisladas en diferentes condiciones ambientales, lo que da lugar a variaciones en la microestructura del cariotipo, especialmente relacionadas con la localización de los NOR y la distribución de las bandas C. Los datos obtenidos fueron útiles para la caracterización citogenética y la diferenciación de S. insculpta y C. modesta, y podrían utilizarse en inferencias evolutivas en el grupo Curimatidae.