Los virus son parásitos obligados que solo llevan a cabo la replicación genómica en sus organismos hospedadores. ORF3a, un nuevo ORF no iniciado por AUG codificado por miembros del género, es necesario para el movimiento a larga distancia en las plantas. Sin embargo, sus interacciones con las proteínas del hospedador aún no están claras. Aquí, utilizamos el virus de los amarillos de Brassica (BrYV)-P3a como cebo para examinar una biblioteca de cDNA de levadura de dos híbridos basada en membranas (MYTH) para explicar el papel funcional de P3a en las infecciones virales. En total, se obtuvieron 138 genes con anotaciones. Los análisis bioinformáticos revelaron que los genes de la fijación de carbono en la fotosíntesis, las vías de fotosíntesis y la señalización MAPK se vieron afectados. Además, se verificó que la permeasa de purinas 14 (AtPUP14), el transportador de glucosinolatos 1 (AtGTR1) y el transportador de nitratos 1.7 (AtNRT1.7) interactuaron con P3a en vivo. P3a y estas tres proteínas interactivas se co-localizaron principalmente en el citoplasma. Los niveles de expresión de , , y se redujeron significativamente en respuesta a BrYV durante las etapas tardías de la infección viral. Además, caracterizamos los roles de AtPUP14, AtGTR1 y AtNRT1.7 en la infección por BrYV utilizando mutantes de inserción de T-DNA, y los , , y mutantes influyeron en la infección por BrYV en diferentes grados.