Este estudio tuvo como objetivo investigar el papel del suministro de Se en la mejora de la tolerancia al estrés osmótico en plántulas de café, al mismo tiempo que se evaluaba el mejor momento para la aplicación de Se. Se evaluaron cinco momentos de aplicación foliar de Se durante el estrés osmótico inducido con PEG-6000, utilizando el día de imposición del estrés como referencia, además de dos tratamientos de control: con estrés osmótico y sin Se, y sin estrés osmótico y con Se. Los resultados demostraron que el estrés osmótico (OS) promovió un estrés leve en las plantas de café (de -1.5 MPa a -2.5 MPa). Las plantas de control bajo estrés mostraron una actividad de las enzimas GR y SOD siete y cinco veces menor en comparación con las que no estaban estresadas, y se encontró que el OS inducía además la degradación del almidón, la cual fue potencializada por el suministro foliar de Se. Las plántulas que recibieron la aplicación foliar de Se 8 días antes del estrés exhibieron mayores niveles de CAT, APX y SOD que el control absoluto (-OS-Se): 771.1%, 356.3% y 266.5% más altos, respectivamente. En conclusión, la pulverización foliar de Se previa es más efectiva que el suministro de Se después del OS para superar la condición adversa. Por otro lado, la aplicación posterior al estrés parece imponer un estrés adicional en las plantas, lo que las lleva a reducir su potencial hídrico.