La raíz de club, causada por Woronin, representa una amenaza importante para la producción de col china (subsp.) en todo el mundo, impactando significativamente el rendimiento de los cultivos, la calidad y el valor económico. El control biológico representa un enfoque prometedor ya que es no tóxico y ecológico, y reduce el riesgo de desarrollo de resistencia a patógenos. En este estudio, nuestro objetivo fue seleccionar actinobacterias que puedan inhibir eficazmente la raíz de club. Seleccionamos 13 cepas de actinobacterias, identificando 2, XDS3-6 y CD1-1, con efectos inhibitorios in vivo sustanciales, logrando tasas de supresión de infección superiores al 64% contra. El análisis filogenético clasificó a XDS3-6 y CD1-1 como y, respectivamente. Ambas cepas exhibieron capacidades de producción de proteasas y glucanasas, esenciales para la supresión patogénica. Además, estas cepas indujeron respuestas de defensa del huésped, como lo evidencian el aumento de la acumulación de ácido jasmonico (JA) y ácido salicílico (SA) y las elevadas actividades de las enzimas relacionadas con la defensa. Los estudios de colonización de las cepas mutantes XDS3-6 y CD1-1 en raíces de col indicaron una colonización sostenida de las raíces, con unidades formadoras de colonias (UFC) máximas a los 20 días post-inoculación, alcanzando 11.0 x 10 UFC/g y 8.5 x 10 UFC/g, respectivamente, y persistiendo durante al menos 30 días. En general, estos hallazgos subrayan el potencial de las cepas XDS3-6 y CD1-1 como agentes de biocontrol efectivos, proporcionando una base teórica para su aplicación en el manejo de la raíz de club en la col china.