Un total de 159 machos jóvenes de búfalos de río italianos mediterráneos destinados a la reproducción, 30 hembras con problemas de fertilidad, 3 hembras jóvenes y un macho gemelo fueron investigados mediante el análisis de su cariotipo utilizando técnicas de bandas CBA y RBA. Todos los machos mostraron un cariotipo normal (2n = 50, XY), aunque un animal presentó un cromosoma X anormal con polimorfismo de banda C, ya que es negativo para la banda C, cuando este cromosoma normalmente muestra la banda C más grande entre todos los cromosomas. Este resultado también fue confirmado por la técnica de mapeo FISH utilizando tres clones BAC bovinos que contienen SAT-I, SAT-III y SAT-IV. La investigación citogenética en hembras mostró que siete hembras, junto con un macho gemelo, estaban afectadas por freemartinismo (quimerismo de leucocitos XX/XY) y fueron posteriormente retiradas de la granja. Exámenes clínicos y necroscópicos en dos hembras mostraron daños severos en los órganos sexuales internos.