Antecedentes: Los macrófagos derivados de monocitos o las células dendríticas son de creciente interés para productos terapéuticos celulares para tratar enfermedades relacionadas con la inflamación y el cáncer. Sin embargo, el método de aislamiento y las condiciones de cultivo aplicadas influyen en la funcionalidad de las células. Para algunos enfoques, se debe prevenir la diferenciación inducida por adhesión en macrófagos para mantener las funciones atribuidas a los monocitos circulantes. Los efectos del método de aislamiento sobre la funcionalidad de los monocitos periféricos no adherentes aún no se han investigado. Métodos: El presente estudio examina el impacto del método de aislamiento en la viabilidad celular, el crecimiento, el metabolismo, la respuesta de citoquinas inducida por inflamación, la capacidad migratoria y la adherencia de monocitos periféricos humanos no adherentes. Los monocitos fueron aislados mediante separación magnética utilizando selección positiva o negativa y cultivados en placas repelentes a células. Resultados: La pureza y el rendimiento de los monocitos fueron mayores después de la selección positiva. Sin embargo, la capacidad de adherencia y migración, la respuesta de citoquinas y la actividad metabólica se redujeron en comparación con los monocitos seleccionados negativamente. La funcionalidad deteriorada presentada en combinación con la reducción del tamaño celular indica, por lo tanto, el inicio de la pérdida de viabilidad celular. Los monocitos no adherentes seleccionados negativamente no mostraron deterioro en la funcionalidad, y la viabilidad se mantuvo alta. En conclusión, este enfoque es más adecuado para realizar modificaciones ex vivo de monocitos antes de la configuración experimental o aplicación terapéutica prevista.