La leptospirosis bovina es una enfermedad reproductiva importante. Este estudio evaluó la efectividad de un protocolo de dos pasos para diagnosticar la leptospirosis genital bovina (LGB) en ocho rebaños con trastornos reproductivos. El protocolo involucró un cribado serológico seguido de pruebas de PCR en muestras de moco cervicovaginal (MCV). Se recolectaron muestras de sangre de 440 vacas para serología, mientras que 304 muestras de MCV se probaron utilizando L32-PCR y 11 muestras positivas se secuenciaron para el gen Y. Los resultados mostraron una alta seroreactividad contra el serogrupo Sejroe, y el 37.2% de las muestras de MCV fueron positivas en PCR. La secuenciación de ADN reveló una identidad máxima (100%) con especies. Este estudio encontró que la recolección de muestras de MCV es rápida y fácil, lo que la convierte en una herramienta de diagnóstico práctica en condiciones de campo. En general, los hallazgos apoyan el protocolo de dos pasos como un método eficiente y confiable para diagnosticar LGB en ganado con problemas reproductivos.