En los últimos años, el sistema de gallinas ponedoras en libertad ha aumentado, impulsado por la sensibilidad social hacia el bienestar animal. Este estudio tuvo como objetivo analizar comparativamente la composición total de lípidos, colesterol y ácidos grasos de las yemas de huevos de gallinas ponedoras de edad avanzada criadas en jaulas enriquecidas (C) y en el sistema de libre pastoreo (FR). Se recolectaron huevos de gallinas Lohmann Brown Classic en la 68ª, 70ª, 72ª y 74ª semana de edad. Las concentraciones de lípidos totales y colesterol no se vieron afectadas (> 0.05) por ninguno de los factores. La yema de huevo del grupo FR mostró menores (< 0.01) ácidos grasos monoinsaturados y mayores (< 0.01) ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) en comparación con el grupo C. Desde un punto de vista nutricional, las proporciones de PUFA n-6/n-3 y PUFA/SFA de la yema de huevo del grupo FR fueron favorablemente más bajas y más altas (< 0.01) en comparación con el grupo C. Por el contrario, la edad de la gallina no afectó (> 0.05) la composición de ácidos grasos de las yemas. Se encontraron interacciones entre los factores para el total de PUFA n-3 y n-6 y la proporción n-6/n-3 (< 0.01), así como el índice trombogénico (< 0.05). En conclusión, los resultados confirmaron que el sistema de libre pastoreo puede mejorar el perfil de ácidos grasos de la yema nutricional y su impacto positivo en la salud humana.