, un microorganismo helicoidal, móvil, sin pared celular y cultivable de la clase Mollicutes, es el agente de la enfermedad de los cítricos obstinados. Actualmente, hay una falta de datos sobre la presencia de este patógeno en los huertos de cítricos de Marruecos. Este estudio tiene como objetivo validar métodos serológicos y moleculares para el diagnóstico rutinario en los huertos de cítricos marroquíes. Para proporcionar una actualización sobre el estado actual del brote del patógeno en los huertos de cítricos de Marruecos, se realizó una encuesta en las principales regiones productoras de cítricos de Marruecos. Se recolectaron un total de 575 muestras de hojas de árboles de cítricos con síntomas atribuibles a la infección. Las muestras se recolectaron durante 2020 y 2021 de 23 huertos de cítricos. La presencia de fue probada en todas las muestras utilizando el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas con sándwich de doble anticuerpo (DAS-ELISA). Usando este método, se encontró que 57 muestras estaban infectadas, 41 muestras tenían resultados dudosos y las muestras restantes fueron negativas. Para corroborar los resultados de la prueba DAS-ELISA, se eligieron 148 muestras para pruebas moleculares adicionales utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) convencional y PCR en tiempo real (qPCR) basadas en pares de cebadores específicos que apuntan a tres genes diferentes (gen putativo similar a la adhesión P58, gen putativo de adhesión P89 y gen de espiralina). Usando cebadores que apuntan al gen putativo similar a la adhesión P58, se detectó mediante amplificación de PCR convencional y en tiempo real a partir de tejido vegetal con diferentes grados de especificidad. Los resultados nos permitieron determinar la incidencia de en todos los huertos de cítricos de Marruecos, con un amplio rango de muestras positivas que varían del 6.5% al 78%, y demostrar que las pruebas moleculares, particularmente los ensayos de PCR en tiempo real que apuntan al gen putativo similar a la adhesión P58, son las más sensibles para realizar un diagnóstico preciso de . De hecho, la PCR en tiempo real con cebadores que apuntan a P58 arrojó resultados positivos de todas las muestras ELISA positivas y dudosas, así como algunas muestras negativas, con un valor de OD cercano a 1.5 veces las muestras sanas, demostrando así una alta sensibilidad de esta técnica.