La disminución de los recursos de plantas medicinales conduce a la pérdida irreversible de su diversidad genética. La preservación del germoplasma de plantas medicinales utilizando criobancos es crucial para mantener la sostenibilidad de estos recursos. Este estudio examinó la eficacia de la criopreservación en 164 semillas de plantas medicinales, identificó principios generales para preservar semillas de plantas medicinales a temperaturas ultra-bajas y estableció un criobanco para semillas de plantas medicinales sensibles a la sequía. Más del 90% de las semillas ortodoxas no se vieron afectadas por la congelación, siendo las condiciones óptimas un contenido de humedad del 5-10% y congelación directa. Las semillas intermedias se congelaron mejor con un contenido de humedad del 7-15%, y aquellas con un contenido de humedad inicial más bajo se adaptaron mejor a la congelación directa. Si bien la congelación de semillas recalcitrantes se vio más influenciada por el contenido de humedad, no hubo un rango específico. La congelación directa es apropiada para semillas recalcitrantes que poseen una cubierta de semilla dura y un núcleo de semilla firme, mientras que las semillas con una cubierta de semilla quebradiza o blanda son más adecuadas para métodos de vitrificación o congelación escalonada. No hubo una correlación significativa entre las alteraciones en los indicadores fisiológicos y bioquímicos y las estructuras microscópicas de las semillas antes y después de la congelación en nitrógeno líquido, así como sus características de almacenamiento. Los hallazgos de esta investigación ofrecen evidencia a favor de la conservación prolongada de semillas de plantas y la amplia utilización de la tecnología de ultra-baja temperatura y proporcionan un ejemplo de protección de la diversidad genética de los recursos vegetales.