El virus Velarivirus 1 de la palma de areca (APV1), el virus de manchas necróticas anulares de la palma de areca (ANRSV) y el virus de manchas necróticas en huso de la palma de areca (ANSSV) son patógenos virales importantes que causan pérdidas económicas significativas en el cultivo de palma de areca. Métodos de detección rápidos y confiables son esenciales para el diagnóstico temprano y la gestión de estos virus en las regiones afectadas. Se diseñaron cebadores específicos basados en las secuencias del gen (CP) de los tres virus objetivo: APV1. Se diseñó un par de cebadores específicos que apuntan a la región (CP) para APV1, mientras que los pares de cebadores para ANRSV y ANSSV se diseñaron basándose en secuencias conservadas que rodean los sitios de escisión de la proteasa Nla-VPg/Nla-Pro. Posteriormente, se desarrolló un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa multiplex (RT-PCR multiplex) para amplificar simultáneamente las secuencias objetivo. El sistema de detección RT-PCR multiplex fue optimizado ajustando parámetros críticos, incluyendo la temperatura de anillado, el tiempo de extensión y el número de ciclos, para asegurar alta especificidad y sensibilidad. La RT-PCR multiplex optimizada produjo con éxito productos de amplificación distintos para los tres virus objetivo: 938 pb para APV1, 527 pb para ANRSV y 250 pb para ANSSV. Las diferencias de tamaño entre los amplicones permitieron que fueran claramente distinguibles mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%. Las condiciones óptimas de reacción se determinaron en una temperatura de anillado de 53.4 grados C y 35 ciclos. Aplicando el método optimizado de RT-PCR multiplex, analizamos 414 muestras de campo recolectadas de la provincia de Hainan. Se identificó a APV1 como el virus más prevalente, detectado en el 22.71% del total de muestras. ANRSV y ANSSV fueron detectados a tasas significativamente más bajas, en el 3.86% y el 0.2% de las muestras, respectivamente. La detección de virus en muestras de areca de la Isla de Hainan reveló claras diferencias regionales en la incidencia de la enfermedad, con tasas más altas en las regiones oriental y central, particularmente en Baoting, Lingshui, Wanning y Qionghai, promediando el 46.73%. En conjunto, estos resultados demuestran que la RT-PCR multiplex desarrollada es una herramienta sensible y práctica para el diagnóstico molecular rutinario y la investigación epidemiológica de APV1, ANRSV y ANSSV en palmas de areca.