Como nuevo marcador tumoral, el nivel de microARN-21 (miARN21) puede proporcionar información importante para el diagnóstico temprano, el tratamiento farmacológico y el pronóstico del cáncer gástrico. Con la herramienta de balizas moleculares que pueden hibridarse específicamente con el miRNA-21 objetivo y generar un cambio de señal de fluorescencia, este trabajo desarrolla un método directo, simple y rápido para la detección de miRNA-21 con un límite de detección de 0,5 nM. En condiciones óptimas, el método se utilizó para detectar la expresión de miRNA-21 en células y tejidos tumorales. Los resultados mostraron diferencias significativas en los niveles de miRNA-21 en células tumorales de diferente origen y grado de malignidad. En 8 casos de tejidos de cáncer gástrico y tejidos adyacentes, el nivel de miRNA-21 en 6 casos era más alto que el de los tejidos adyacentes, 1 caso tenía un nivel de expresión más bajo que el de los tejidos adyacentes, y 1 caso no tenía ninguna diferencia significativa. Además, se utilizó el método qRT-PCR para verificar los resultados de detección basados en el método de detección con sonda fluorescente. Los resultados consistentes muestran que el ensayo de baliza molecular tiene una buena perspectiva en la detección directa y rápida de la expresión de miRNA-21 y será ampliamente utilizado en la investigación funcional y el diagnóstico clínico de microRNA.