Un método para la determinación simultánea de Teanina y ácido gamma-aminobutírico (GABA), como los nuevos alimentos de aminoácidos, que se estableció utilizando la derivatización antes de la columna y la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). El cloruro de 4-dimetilaminoazobenceno-4-sulfonilo (DABS-Cl) se emplea como reactivo de derivatización con cromóforo unido a la Teanina y GABA, que carece de cromóforo para el análisis DAD en su estructura original. Después de que se confirmara la longitud de onda de detección, las condiciones cromatográficas y de derivatización también se optimizaron, incluyendo la columna cromatográfica, las fases móviles y sus gradientes, la temperatura y el tiempo de derivatización, la cantidad aditiva de solución tampón y el reactivo de derivatización. La verificación metodológica mostró que el derivado de la Teanina (DABS-Teanina) y el derivado del GABA (DABS-GABA) tienen una buena linealidad en el rango de 1-100 g/mL, con coeficientes de correlación de 0.9996 y 0.9995, respectivamente. Las recuperaciones para ambos aminoácidos estuvieron entre el 93.95% y el 103.90%, con desviaciones estándar relativas que van del 0.99% al 3.93%. El límite de detección (LOD) fue de 0.6 mg/kg para la Teanina y 0.2 mg/kg para el GABA. El límite de cuantificación (LOQ) fue de 1.7 mg/kg para la Teanina y 0.6 mg/kg para el GABA. Además, cinco productos comerciales que contenían Teanina o GABA en dos matrices (caramelos y bebidas) fueron analizados por el método propuesto para su validación. Los contenidos promedio de Teanina y GABA estuvieron en el rango de 307.49-1312.13 mg/kg y 22.98-6744.55 mg/kg, respectivamente. El método desarrollado presenta un fácil pretratamiento de muestra, un sistema de derivatización simple, una buena especificidad de separación, una buena repetibilidad, precisión y confiabilidad, y puede satisfacer la determinación a gran escala de la Teanina y el GABA en varios sustratos alimenticios.