Se desarrollaron dos métodos espectrofluorométricos nuevos, sensibles y selectivos para la determinación del mesilato de gemifloxacina (GFX) en comprimidos y en plasma humano enriquecido. El método A se basó en la medición del comportamiento espectral de fluorescencia mejorada de GFX en un sistema micelar de dodecil sulfato de sodio (SDS). En una solución acuosa de tampón de acetato con un pH de 5,5, la intensidad de fluorescencia de GFX se multiplicó por diez en presencia de SDS. La intensidad de la fluorescencia se midió a 402 nm tras la excitación a 274 nm. El método B se basó en la reacción de condensación de Hantzsch entre el grupo amino primario de GFX con acetilacetona y formaldehído en tampón de acetato de pH 3,5, produciendo un derivado altamente fluorescente. La reacción del GFX con la solución del sistema acetilacetona-formaldehído dio lugar a un desplazamiento batocrómico de las longitudes de onda de emisión (476 nm) y de excitación (420 nm). La intensidad de la fluorescencia fue directamente proporcional a la concentración en el rango de 10-1000 ng/ml y 100-2000 ng/ml para los métodos A y B, respectivamente. Los métodos propuestos se aplicaron con éxito para la determinación de GFX en sus comprimidos y en plasma enriquecido. Por lo tanto, estos métodos pueden considerarse de verdadero interés para un análisis de control de calidad fiable y práctico de GFX.