Se investigó la intensificación del proceso de la tecnología ultrasónica asistida por microondas para la extracción de hordeína de la cebada. Se utilizó la metodología de superficie de respuesta para optimizar las condiciones de extracción y analizar la interacción entre cuatro variables seleccionadas: temperatura, potencia de microondas, potencia ultrasónica y tiempo de extracción. El rendimiento de extracción de hordeína validado alcanzó 8,84 t 78°C, potencia de microondas 298 W, y potencia ultrasónica 690 W tras 20 min como condiciones óptimas. En comparación con la extracción tradicional en baño de agua (4,7%), la tecnología ultrasónica asistida por microondas aumentó eficazmente el rendimiento de extracción de la hordeína y redujo el tiempo de extracción. Según el modelo cuadrático obtenido (R2 = 0,9457), la potencia ultrasónica y el tiempo de extracción fueron los dos primeros factores significativos. Sin embargo, la temperatura limitó los efectos de otros factores durante la extracción. Se utilizaron SDS-PAGE y microscopía electrónica de barrido para identificar el extracto de hordeína y aclarar la diferencia entre las dos fracciones de hordeína extraídas con los métodos nuevo y tradicional, respectivamente. La tecnología ultrasónica asistida por microondas proporcionó una nueva forma de mejorar el rendimiento de la extracción de hordeína a partir de cebada y podría ser un buen candidato para la aplicación industrial de la intensificación de procesos.