Los objetivos de este estudio fueron inactivar las enzimas alfa-amilasa, lipasa, proteasa y peroxidasa en la harina con dióxido de carbono supercrítico (scCO), y optimizar las condiciones de tratamiento enzimático. La inactivación enzimática es importante, debido a la indeseabilidad de ciertas enzimas de la harina que causan reacciones adversas durante el almacenamiento como la rancidez desagradable de la harina, y al mismo tiempo, reducen la vida útil de la harina. Por lo tanto, las enzimas crudas y la harina fueron expuestas inicialmente al scCO para determinar el efecto en la actividad enzimática específica bajo condiciones apropiadas. La actividad de las enzimas no deseadas lipasa y peroxidasa disminuyó bajo las condiciones óptimas de exposición al scCO, la lipasa en un 30%, y la peroxidasa en un 12%, respectivamente. Se descubrió que la inactivación de enzimas en la harina de trigo ocurrió, donde, al mismo tiempo, este método sostenible permite regular la actividad enzimática en el proceso de horneado. Posteriormente, se estudió el efecto del scCO en las propiedades fisicoquímicas de la harina, cambios morfológicos en los gránulos de almidón y el contenido de lípidos totales. En la harina de trigo blanco tratada con scCO, el contenido de grasa disminuyó en un 46.15 +/- 0.5%, la estructura del grano no se dañó, y el pan como producto final tuvo un volumen específico menor. Por lo tanto, esta podría ser una tecnología prometedora para el pretratamiento de la harina, potencialmente impactando en la prolongación de su vida útil.