La infestación de insectos y la interferencia de malas hierbas tienen un impacto seriamente negativo en el crecimiento, rendimiento y calidad del grano del maíz. En este estudio, se desarrollaron plantas de maíz transgénico que albergan tres genes exógenos, que fueron construidos en un solo T-DNA para la protección contra insectos y malas hierbas. Se determinaron los sitios de integración del transgen en los cromosomas en dos eventos de maíz transgénico, CVC-1 y CVC-2, utilizando secuenciación de genoma completo y detección PCR específica. Como revelaron los bioensayos de insectos en laboratorio, estos dos eventos transgénicos exhibieron una fuerte toxicidad insecticida contra tres especies principales de insectos Lepidoptera, con tasas de mortalidad que superaron el 96%, 100% y 100%, respectivamente, después de seis días de infestación. Además, CVC-1 mostró una alta tolerancia al glifosato en condiciones de campo. Las expresiones exitosas de en varios tejidos en diferentes etapas de desarrollo de CVC-1 fueron validadas a niveles transcripcional y translacional utilizando PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) y ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), respectivamente. Estos hallazgos demostraron que el maíz transgénico CVC-1 desarrollado utilizando esta construcción de triple gen tiene una excelente resistencia a insectos y tolerancia a herbicidas, lo que puede proporcionar un valioso recurso de germoplasma y apoyo de datos para el futuro mejoramiento del maíz en el control de insectos y malas hierbas.