Los triterpenos pentacíclicos, incluidos el lupeol, el alfa-amirina y la beta-amirina, presentan una amplia gama de actividades biológicas, incluidas propiedades antiinflamatorias, anticancerígenas y gastroprotectoras. La fitociencia de los tejidos de diente de león ha sido ampliamente descrita. La biotecnología vegetal ofrece una alternativa para la producción de metabolitos secundarios y varios ingredientes activos de plantas ya se sintetizan a través de cultivos in vitro. Este estudio tuvo como objetivo establecer un protocolo adecuado para el crecimiento celular y determinar la acumulación de alfa-amirina y lupeol en cultivos de suspensión celular bajo diferentes condiciones de cultivo. Para ello, se investigaron la densidad del inóculo (0.2% a 8%), la edad del inóculo (de 2 a 10 semanas) y la concentración de la fuente de carbono (1%, 2.3%, 3.2% y 5.5%). Se utilizaron explantes de hipocótilo para la inducción de callos. La edad, el tamaño y las concentraciones de sacarosa fueron estadísticamente significativas en el crecimiento celular (peso fresco y seco), la calidad celular (agregación, diferenciación, viabilidad) y el rendimiento de triterpenos. Las mejores condiciones para establecer un cultivo en suspensión se lograron utilizando un callo de 6 semanas a una concentración de 4% y 1% de sacarosa. Los resultados indican que se pueden obtener 0.04 (+/-0.02) mg/g de alfa-amirina y 0.03 (+/-0.01) mg/g de lupeol en cultivo en suspensión bajo estas condiciones iniciales en la octava semana de cultivo. Los resultados del presente estudio proporcionan un contexto para futuros estudios en los que se podría incorporar un elicitor para aumentar la producción a gran escala de alfa-amirina y lupeol.