La avispa de la agalla del castaño asiático (ACGW) (Yasumatsu), nativa de China, es una plaga invasora que causa pérdidas económicas significativas en especies. Mientras que algunos cultivares muestran resistencia total al inhibir el desarrollo del insecto en los brotes, los mecanismos de defensa subyacentes siguen siendo poco claros. En este estudio, se investigó la acumulación y distribución de peróxido de hidrógeno (HO) en brotes dormantes de cultivares de castaño que son resistentes y susceptibles utilizando el método de tinción con 3,3-diaminobenzidina (DAB). Los brotes fueron examinados bajo un estereomicroscopio durante etapas clave del desarrollo de la plaga, incluyendo la oviposición, la transición de huevo a larva, la inducción de agallas y el desarrollo de agallas. Se detectaron niveles básicos de HO en todos los brotes; sin embargo, estos niveles variaron entre cultivares, siendo los cultivares resistentes los que presentaron niveles basales más bajos. Se encontró que el grado de acumulación de HO variaba dependiendo de la interacción planta-insecto, los procesos fisiológicos y las características específicas de cada cultivar. La tinción histoquímica reveló que las manchas marrones indicativas de acumulación de HO estaban concentradas en los haces vasculares de los primordios foliares y en las regiones apicales. En los cultivares híbridos resistentes, la respuesta de defensa se activó en una etapa más temprana, mientras que en los cultivares resistentes de Mill., la respuesta se retrasó pero fue más robusta. Aunque se observaron niveles consistentemente altos de HO a lo largo de la interacción con la plaga en cultivares susceptibles, el desarrollo de agallas no fue inhibido. Durante el inicio de la ruptura fisiológica del brote, se observó un aumento en la acumulación de HO en todos los cultivares. Este aumento se asoció con la endodormancia en cultivares susceptibles y con ambos mecanismos de defensa y procesos de endodormancia en cultivares resistentes. Estos hallazgos destacan el papel significativo del HO en las respuestas de defensa de las plantas, al tiempo que apoyan su función como una molécula de señalización multifuncional involucrada en el desarrollo de agallas y la regulación de procesos fisiológicos.