El cáncer de mama es la principal causa de muerte relacionada con el cáncer en mujeres en todo el mundo. Se sabe que el cáncer de mama muestra alteraciones significativas en el microambiente tumoral (TME), que está compuesto por una variedad de células inmunitarias, incluidas las células asesinas naturales (NK), que tienen un papel clave en el desarrollo tumoral o en las respuestas antitumorales en pacientes con cáncer de mama. Las líneas celulares Luminal B (BT474) y de cáncer de mama triple negativo (HS578T) se cultivaron en sistemas de modelos 2D y 3D. Se aislaron PBMC de donantes sanos y se trataron con vesículas extracelulares (EV) de monocapas y esferoides de BT474 y HS578T y se analizaron utilizando enfoques cito-fluorimétricos. Observamos que las EV pueden alterar la activación y presencia de células NK CD335+/CD11b+. Las EV derivadas de células BT474 y HS578T desencadenan la activación y, simultáneamente, una reducción en el porcentaje de células NK CD335+/CD11b+. Además, las EV derivadas de BT474 también reducen significativamente las células T reguladoras (T-reg) CD39+. Nuestros datos preliminares sugieren que el uso de EV para tratar tumores podría alterar potencialmente componentes del sistema inmunológico, lo que provoca una hiperactivación de tipos celulares específicos y puede llevar a un crecimiento agresivo. Estos datos guiarán el diseño de nuevos enfoques diagnósticos personalizados basados en un estudio en profundidad del TME.