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Expresión y caracterización de la α-amilasa en Escherichia coli de Geobacillus thermodenitrificans DSM-465
La alfa-amilasa, que cataliza la hidrólisis del almidón, es una enzima ubicua con importantes aplicaciones industriales. Un gen de 1698 pb que codifica para la amilasa de 565 aminoácidos se amplificó por PCR a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM465, se clonó en el plásmido pET21a (+), se expresó en la cepa BL21 (DE3) de E. coli y se caracterizó. La enzima recombinante presentó un peso molecular de 63 kDa, un pH óptimo de 8, una temperatura óptima de 70 °C y un valor de KM de 157,7 µM. A escala piloto, la enzima purificada eliminó eficazmente hasta el 95 % del almidón del tejido de algodón, lo que indica su capacidad de desencolado a alta temperatura. El modelo 3D de la enzima, construido con Raptor-X y validado por Ramachandran, se mostró como un monómero con un 31 % de hélices α, un 15 % de láminas β y un 52 % de asas. Estudios de acoplamiento han demostrado la mayor afinidad de unión de la enzima con la amilopectina (∆G -10,59). Según nuestros resultados, Asp 232, Glu 274, Arg 448, Glu 385, Asp 34, Asn 276 y Arg 175 constituyen el sitio activo potencial de la enzima.
Autores: Al-Amri, A.; Al-Ghamdi, M. A.; Khan, J. A.; Altayeb, H. N.; Alsulami, H.; Sajjad, M.; Baothman, O. A.; Nadeem, M. S.
Idioma: Inglés
Editor: Takako Matsumura-Tundisi
Año: 2022
Artículos
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Licencia
Atribución
Consultas: 22
Citaciones: Sin citaciones
Este documento es un artículo elaborado por Al-Amri, A., Al-Ghamdi, M. A., Khan, J. A., Altayeb, H. N., Alsulami, H., Sajjad, M., Baothman, O. A. y Nadeem, M. S. (Universidad Rey Abdulaziz, Arabia Saudita y Universidad del Punyab, Pakistán) para Brazilian Journal of Biology Vol. 82. Publicación de Instituto Internacional de Ecología. Contacto: bjb@bjb.com.br
La alfa-amilasa, que cataliza la hidrólisis del almidón, es una enzima ubicua con importantes aplicaciones industriales. Un gen de 1698 pb que codifica para la amilasa de 565 aminoácidos se amplificó por PCR a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM465, se clonó en el plásmido pET21a (+), se expresó en la cepa BL21 (DE3) de E. coli y se caracterizó. La enzima recombinante presentó un peso molecular de 63 kDa, un pH óptimo de 8, una temperatura óptima de 70 °C y un valor de KM de 157,7 µM. A escala piloto, la enzima purificada eliminó eficazmente hasta el 95 % del almidón del tejido de algodón, lo que indica su capacidad de desencolado a alta temperatura. El modelo 3D de la enzima, construido con Raptor-X y validado por Ramachandran, se mostró como un monómero con un 31 % de hélices α, un 15 % de láminas β y un 52 % de asas. Estudios de acoplamiento han demostrado la mayor afinidad de unión de la enzima con la amilopectina (∆G -10,59). Según nuestros resultados, Asp 232, Glu 274, Arg 448, Glu 385, Asp 34, Asn 276 y Arg 175 constituyen el sitio activo potencial de la enzima.
Descripción
La alfa-amilasa, que cataliza la hidrólisis del almidón, es una enzima ubicua con importantes aplicaciones industriales. Un gen de 1698 pb que codifica para la amilasa de 565 aminoácidos se amplificó por PCR a partir de Geobacillus thermodenitrificans DSM465, se clonó en el plásmido pET21a (+), se expresó en la cepa BL21 (DE3) de E. coli y se caracterizó. La enzima recombinante presentó un peso molecular de 63 kDa, un pH óptimo de 8, una temperatura óptima de 70 °C y un valor de KM de 157,7 µM. A escala piloto, la enzima purificada eliminó eficazmente hasta el 95 % del almidón del tejido de algodón, lo que indica su capacidad de desencolado a alta temperatura. El modelo 3D de la enzima, construido con Raptor-X y validado por Ramachandran, se mostró como un monómero con un 31 % de hélices α, un 15 % de láminas β y un 52 % de asas. Estudios de acoplamiento han demostrado la mayor afinidad de unión de la enzima con la amilopectina (∆G -10,59). Según nuestros resultados, Asp 232, Glu 274, Arg 448, Glu 385, Asp 34, Asn 276 y Arg 175 constituyen el sitio activo potencial de la enzima.