En los moluscos bivalvos marinos, las moléculas insaturadas llamadas carotenoides están presentes en la dieta natural y desempeñan un papel importante en diferentes procesos biológicos, especialmente en la reproducción. Para comprender mejor estos compuestos en Nodipecten nodosus, fue necesario desarrollar un protocolo adecuado para la extracción de carotenoides de las gónadas. Las gónadas hembra de vieiras cultivadas (75 mm de longitud) se liofilizaron y maceraron en nitrógeno líquido. Para verificar el efecto de la composición de los organosolventes en las soluciones de extracción, se probaron dos disolventes orgánicos: acetona y hexano (Ac = O:Hex) en cuatro proporciones: 1:1, 1:3, 1:5 y 2:3, en cuatro tiempos de extracción estática: 0, 5, 10 y 15 minutos. El contenido total de carotenoides y astaxantina se determinó en los extractos crudos mediante espectrofotometría UV-visible y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), respectivamente. Se utilizaron alícuotas triplicadas de 50 mg para cada tratamiento. Los resultados indicaron que la mejor extracción única (0,312 ± 0,016 µg de carotenoides/mg) se obtuvo con Ac = O: Hex 1:3, durante 15 minutos. Mediante una metodología de extracción exhaustiva (10x), se obtuvo un rendimiento superior (0,41 ± 0,001 µg de carotenoides/mg) a partir de una muestra de gónada, en comparación con el valor más alto encontrado para una sola extracción. El contenido de astaxantina se redujo en un 8,6 % en el ensayo de conservación del extracto de carotenoides, es decir, a –18 °C, 26 días de incubación, en atmósfera de N₂.