Las células madre de pulpa dental humana (DPSCs) exhiben capacidades de diferenciación multilineal y propiedades clonogénicas y proliferativas superiores. Sin embargo, el uso de componentes derivados de animales como FBS plantea preocupaciones sobre la aplicación clínica de terapias basadas en células madre. El fibrinógeno rico en plaquetas (PRF) derivado de sangre humana es rico en fibrina, plaquetas y factores de crecimiento y actúa como un andamio bioactivo para el injerto con biomateriales. En este estudio, evaluamos la eficacia del medio condicionado de PRF (CM) en la promoción de la proliferación y diferenciación osteogénica de DPSCs en comparación con el medio de cultivo estándar suplementado con FBS. Una comparación de DPSCs cultivadas en FBS y PRF-CM no reveló diferencias en las características o morfología. Sin embargo, las células cultivadas con PRF-CM exhibieron tasas de proliferación e números celulares inferiores durante el pasaje en comparación con aquellas cultivadas con FBS. En contraste, las DPSCs cultivadas en PRF-CM mostraron niveles significativamente más altos de calcificación, y la RT-PCR confirmó que los niveles de expresión génica de marcadores asociados con la diferenciación osteoblástica aumentaron significativamente. El enfoque de PRF-CM ofrece un método conveniente, directo y ventajoso para el cultivo de DPSCs, sin depender de componentes derivados de animales. En resumen, este estudio introduce una nueva aplicación de PRF-CM para mejorar la osteogénesis de DPSCs, que proporciona una alternativa al medio de cultivo FBS y aborda las preocupaciones asociadas con el uso de componentes derivados de animales en entornos clínicos.