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Flotación: un nuevo método para evitar los inhibidores de la PCR en el diagnóstico de Lawsonia intracellularis

La bacteria intracelular obligada Lawsonia intracellularis causa enteritis y crecimiento deficiente en cerdos destetados. Su cultivo es difícil y el diagnóstico ante mortem se basa principalmente en técnicas como la reacción en cadena de la polimerasa. Sin embargo, los resultados falsos negativos causados por la presencia de factores inhibidores de la PCR constituyen un problema. Este estudio tenía como objetivo desarrollar y evaluar una nueva técnica, la flotación, para separar L. intracellularis de los inhibidores en las heces antes de la PCR. La técnica se evaluó comparándola con dos métodos previamente evaluados y utilizados habitualmente, la preparación mediante lisado por ebullición combinada con PCR anidada y la preparación mediante un kit comercial combinada con PCR convencional. La centrifugación de densidad continua de muestras fecales que contenían L. intracellularis sugirió que la densidad de flotación del microbio se situaba entre 1,064 y 1,077 g/mL. Se probaron varias configuraciones de flotación para lograr una separación óptima del microbio de los inhibidores y las partículas fecales. La configuración finalmente seleccionada hizo flotar L. intracellularis entero desde el lugar de aplicación en el fondo hasta la parte superior del gradiente, mientras que los componentes inhibidores permanecieron principalmente en el fondo. La PCR se realizó directamente sobre el material recuperado de la interfase superior. El método se evaluó en 116 muestras clínicas. En comparación con la preparación de muestras por ebullición combinada con la PCR anidada, se inhibieron menos muestras, pero también se identificaron menos positivos. En comparación con la preparación mediante un kit comercial combinada con PCR convencional, utilizada actualmente para el diagnóstico rutinario, se obtuvieron resultados similares. Sin embargo, el nuevo método fue comparativamente más rápido de realizar. El nuevo método, basado en la flotación de Lawsonia intracellularis combinada con la PCR convencional, era muy adecuado para el diagnóstico rutinario.

Autores: Magdalena, Jacobson; Börje, Norling; Anders, Gunnarson; Anna, Aspan

Idioma: Inglés

Editor: Hindawi Publishing Corporation

Año: 2009

Disponible con Suscripción Virtualpro

Artículo científico


Categoría

Ingeniería y Tecnología

Licencia

CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual

Consultas: 9

Citaciones: Sin citaciones


Hindawi

International Journal of Microbiology

Volume 2009, Article ID 410945, 7 pages

https://doi.org/10.1155/2009/410945

Magdalena Jacobson1, Börje Norling2, Anders Gunnarson3, Anna Aspan3

1 , Sweden

2 , Sweden

3 , Sweden

Academic Editor: Dulal Borthakur

Contact: ijmicro@hindawi.com

Descripción
La bacteria intracelular obligada Lawsonia intracellularis causa enteritis y crecimiento deficiente en cerdos destetados. Su cultivo es difícil y el diagnóstico ante mortem se basa principalmente en técnicas como la reacción en cadena de la polimerasa. Sin embargo, los resultados falsos negativos causados por la presencia de factores inhibidores de la PCR constituyen un problema. Este estudio tenía como objetivo desarrollar y evaluar una nueva técnica, la flotación, para separar L. intracellularis de los inhibidores en las heces antes de la PCR. La técnica se evaluó comparándola con dos métodos previamente evaluados y utilizados habitualmente, la preparación mediante lisado por ebullición combinada con PCR anidada y la preparación mediante un kit comercial combinada con PCR convencional. La centrifugación de densidad continua de muestras fecales que contenían L. intracellularis sugirió que la densidad de flotación del microbio se situaba entre 1,064 y 1,077 g/mL. Se probaron varias configuraciones de flotación para lograr una separación óptima del microbio de los inhibidores y las partículas fecales. La configuración finalmente seleccionada hizo flotar L. intracellularis entero desde el lugar de aplicación en el fondo hasta la parte superior del gradiente, mientras que los componentes inhibidores permanecieron principalmente en el fondo. La PCR se realizó directamente sobre el material recuperado de la interfase superior. El método se evaluó en 116 muestras clínicas. En comparación con la preparación de muestras por ebullición combinada con la PCR anidada, se inhibieron menos muestras, pero también se identificaron menos positivos. En comparación con la preparación mediante un kit comercial combinada con PCR convencional, utilizada actualmente para el diagnóstico rutinario, se obtuvieron resultados similares. Sin embargo, el nuevo método fue comparativamente más rápido de realizar. El nuevo método, basado en la flotación de Lawsonia intracellularis combinada con la PCR convencional, era muy adecuado para el diagnóstico rutinario.

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