El método de extracto líquido se utiliza comúnmente para evaluar la citotoxicidad y bioactividad de los materiales. Aunque la ISO ha recomendado pautas para los métodos de prueba, las variaciones en el período de elución y la forma de las muestras pueden influir en los resultados biológicos. El objetivo de este estudio fue investigar la influencia de la forma del material y el período de elución de Biodentine en la proliferación y mineralización de las células madre de pulpa dental (DPSCs). Discos o polvo de Biodentine (0.2 g) se sumergieron en medio de cultivo (10 mL) durante 1, 3 o 7 días (D1, D3 y D7). Los eluentes se filtraron y se utilizaron para tratar las DPSCs. Se determinó el perfil de liberación de calcio y el pH. La proliferación celular se evaluó mediante MTS durante 3 días, y la mineralización y diferenciación se evaluaron mediante tinción con alizarina roja S (Cang de ADN) y qRT-PCR (MEPE, DSPP, DMP-1, RUNX2, COL-I y OCN) durante 14 días. Se realizó un análisis estadístico con un ANOVA de uno o dos factores y la prueba post hoc de Tukey (pH, liberación de calcio y proliferación) o la prueba de Mann-Whitney (alpha = 0.05). El pH y la liberación de iones de calcio de los eluentes en polvo fueron significativamente más altos que los de los eluentes en disco. El eluente en polvo promovió una extensa muerte celular, mientras que la forma de disco fue citocompatible. Todos los eluentes en disco aumentaron significativamente la expresión génica y la mineralización después de 14 días en comparación con el control no tratado. D7 indujo menos mineralización y diferenciación en comparación con D1 y D3. Por lo tanto, la forma de los materiales y el tiempo de elución son aspectos críticos a considerar al evaluar la bioactividad de los materiales, ya que este binomio puede afectar positiva y negativamente los resultados biológicos.