La superfamilia de enzimas formadoras de acil-adenilato, formada por las acil- y aril-CoA sintetasas, el dominio de adenilación de las sintetasas de péptidos no ribosomales y la luciferasa, tiene tres motivos de firma (I-III) y diez motivos centrales conservados (A1-A10), algunos de los cuales se solapan con los motivos de firma. La secuencia de consenso para el motivo de firma III (motivo central A7) en la acetil-CoA sintetasa es Y-X-S/T/A-G-D, con una quinta posición invariable, una primera y una cuarta posiciones altamente conservadas, y una segunda y una tercera posiciones variables. Los estudios cinéticos de las variantes de la enzima revelaron que una alteración en cualquier posición daba lugar a una fuerte disminución de la tasa catalítica, aunque los efectos más perjudiciales se observaban cuando se cambiaban las posiciones primera o quinta. El modelado estructural sugiere que la Tyr altamente conservada en la primera posición desempeña un papel clave en la arquitectura del sitio activo a través de la interacción con una Gln altamente conservada del sitio activo, y el Asp invariable en la quinta posición desempeña un papel crítico en la unión del ATP y la catálisis a través de la interacción con los grupos 2′- y 3′-OH de la fracción de ribosa. Las interacciones entre este Asp y el ATP se observan en todas las estructuras disponibles para los miembros de la superfamilia, lo que concuerda con un papel crítico en la unión de sustratos y la catálisis para este residuo invariable.