El papel de la señalización Notch se estudia ampliamente en la regeneración del músculo esquelético, pero se sabe poco sobre sus influencias en la síntesis de proteínas musculares (MPS). El propósito de este estudio fue investigar si la señalización Notch está involucrada en la regulación de la MPS. Las células C2C12 fueron tratadas con un inhibidor de -secretasa (GSI) para determinar el efecto de la señalización Notch reducida en la MPS y los marcadores de señalización anabólica. El tratamiento con GSI aumentó la hipertrofia de los miotubos al incrementar la acumulación de mionúcleos (núcleos/miotubo: = 0.01) y el dominio mionuclear (área del miotubo por núcleos fusionados: < 0.001) en células C2C12 en diferenciación. El tratamiento con GSI también elevó la hipertrofia de los miotubos en C2C12 diferenciadas (área/miotubo; = 0.01). En conjunto, el tratamiento con GSI aumentó pmTOR Ser2448 ( = 0.01) y la síntesis de proteínas (utilizando el método SUnSET) en miotubos ( < 0.001). Examinar la expresión de proteínas aguas arriba de mTOR reveló reducciones en PTEN ( = 0.04), con posteriores elevaciones en pAKT Thr308 ( < 0.001) y pAKT Ser473 ( = 0.05). Estos hallazgos revelan que el tratamiento con GSI eleva la hipertrofia de los miotubos a través de la augmentación de la fusión y la MPS. Este estudio arroja luz sobre los posibles roles multifacéticos de Notch dentro del músculo esquelético. Además, hemos demostrado que Notch puede modular la vía PTEN/AKT/mTOR.