La obtención de imágenes tridimensionales de procesos intracelulares rápidos mediante microscopía de fluorescencia debe ofrecer una resolución espacial adecuada y una alta resolución temporal, al tiempo que se minimiza el blanqueamiento del fluoróforo y la citotoxicidad. Presentamos una visión introductoria condensada de tres métodos contemporáneos utilizados principalmente para la obtención de imágenes de células vivas en 3D y comparamos su desempeño en términos de resolución temporal y espacial, flexibilidad de imagen y fotodaño en las muestras: microscopía confocal de barrido puntual, microscopía confocal de disco giratorio y microscopía de lámina de luz en celosía. Mientras que los instrumentos de barrido puntual son insuperables en cuanto a rendimiento confocal, flexibilidad y capacidad de configuración de su trayectoria óptica, los diseños ópticos de disco giratorio y de lámina de luz en celosía sobresalen en velocidad de adquisición y en bajos niveles de deterioro de la muestra inducido por la luz.