Las glicosidasas (GH), enzimas que descomponen los enlaces glicosídicos en carbohidratos y entre carbohidratos y no carbohidratos, son prevalentes en plantas, animales, microorganismos y otros organismos. El tomate es un cultivo significativo que contiene la familia de genes GH17. Sin embargo, su papel en los tomates aún no ha sido completamente investigado. En este estudio, identificamos 43 genes GH17 del genoma del tomate, distribuidos de manera desigual en 12 cromosomas. Además, analizamos su estructura genética, relaciones filogenéticas, elementos promotores y patrones de expresión. El análisis de los elementos promotores indicó sus posibles roles en respuesta a estrés biótico y abiótico, así como los efectos de fitohormonas en el crecimiento y desarrollo. Los estudios de expresión en diferentes tejidos de tomate revelaron que 10 genes se expresaron específicamente en órganos florales, siendo SlA6 el más expresado al inicio de la formación de botones. Mediante la tecnología de edición genética CRISPR/Cas9, se generaron plantas knockout. La caracterización fenotípica mostró que la viabilidad del polen, la germinación del tubo polínico, el peso del fruto y el número de semillas se redujeron significativamente en el mutante, pero el contenido de sólidos solubles (TSS) fue significativamente mayor en el mutante, lo que sugiere que SlA6 afecta el desarrollo del polen y la calidad del fruto.