Hsp33, una chaperona de retención regulada por redox procariótica, ha sido recientemente identificada como capaz de exhibir una actividad de desdoblamiento y agregación contra el factor de elongación Tu (EF-Tu) en su estado reducido. En este estudio, investigamos el efecto del factor de elongación Ts (EF-Ts) y el factor desencadenante (TF) en el desdoblamiento y la agregación de EF-Tu mediado por Hsp33 utilizando filtración en gel, dispersión de luz, dicromatografía circular y calorimetría de titulación isotérmica. Encontramos que el desdoblamiento de EF-Tu y la posterior agregación inducida por Hsp33 eran evidentes incluso en su estado complejo con EF-Ts, que mejoraba la estabilidad de EF-Tu. Además, aunque TF por sí solo no tuvo un efecto sustancial en la estabilidad de EF-Tu, amplificó notablemente el desdoblamiento y la agregación de EF-Tu mediado por Hsp33. En conjunto, los resultados presentes constituyen el primer ejemplo de actividad sinérgica de desdoblamiento/agregación de chaperonas moleculares y sugieren que la estabilidad de EF-Tu es modulada por una red sofisticada de chaperonas moleculares para regular la biosíntesis de proteínas en células bajo condiciones de estrés.