El fosfato (Pi) es un macronutriente vital para el crecimiento y desarrollo de las plantas, y el monitoreo preciso de su dinámica celular es esencial para comprender la homeostasis de Pi y su interacción con las respuestas al estrés. Biosensores basados en FRET genéticamente codificados, como FLIPPi, permiten la visualización en tiempo real y no invasiva de los niveles de Pi citosólico en tejidos vivos. En este estudio, se utilizaron líneas de arroz que expresan un biosensor FLIPPi para monitorear la dinámica de Pi citosólico en células epidérmicas de raíces. La funcionalidad del sensor se confirmó midiendo las respuestas de FRET a suministros de Pi graduados, revelando una reducción consistente en las proporciones de FRET con el aumento de las concentraciones de Pi, reflejando niveles elevados de Pi citosólico. Las comparaciones con una variante de FLIPPi insensible a Pi confirmaron la especificidad de los cambios observados. Además, la imagenología en vivo demostró alteraciones rápidas y dinámicas en el Pi citosólico tras el tratamiento con hormonas relacionadas con la defensa y elicitores de respuestas inmunitarias, apoyando un vínculo entre la señalización de Pi y la inmunidad de las plantas. Finalmente, la aplicación de fosfito, un análogo de Pi, alteró la dinámica de Pi tanto en arroz como en otras especies, sugiriendo una interferencia con la acumulación de Pi. En conjunto, nuestros hallazgos establecen a FLIPPi como una herramienta confiable para el monitoreo in vivo de Pi en plantas de arroz y otras especies, los sistemas modelo para estudios en especies dicotiledóneas y monocotiledóneas, respectivamente.