Introducción: Las fórmulas hipoalergénicas preparadas a partir de proteínas de leche de vaca hidrolizadas suelen utilizarse para el manejo de la alergia a la leche de vaca (ALV) en bebés. En este estudio, tanto ensayos in vitro como un modelo de ratón in vivo para ALV se utilizaron para evaluar el potencial sensibilizante y alergénico de un nuevo hidrolizado extenso de suero (eWH). Métodos: Se utilizó cromatografía de permeación en gel para caracterizar la distribución del peso molecular de los péptidos. La antigenicidad residual se midió utilizando un ELISA de beta-lactoglobulina, así como con inmunotransferencia utilizando anticuerpos anti-beta-lactoglobulina (BLG) y anti-alfa-lactoalbúmina. La alergenicidad residual in vitro se evaluó utilizando células huFcRIalpha-RBL-2H3 sensibilizadas con IgE humana anti-bovina BLG. El potencial sensibilizante y alergénico in vivo se evaluó en un modelo de ratón con ALV midiendo la respuesta alérgica cutánea aguda, el puntaje de shock anafiláctico, la temperatura corporal, el suero mMCP-1, IgE específica de suero y citoquinas. Resultados: No se observó antigenicidad y alergenicidad residual in vitro del eWH. Los ratones sensibilizados con eWH no mostraron reacción alérgica cutánea aguda después del desafío con suero, confirmado por la ausencia de IgE específica de suero y síntomas anafilácticos, y disminución en la temperatura corporal y los niveles de mMCP-1. Conclusiones: Los resultados de nuestro enfoque translacional in vitro e in vivo para evaluar la capacidad de sensibilización y la alergenicidad residual indican que el nuevo eWH desarrollado es seguro para su uso en bebés con ALV. Esto fue posteriormente confirmado en un estudio clínico en el que este eWH fue tolerado por más del 90% (con un 95% de confianza) de bebés o niños con ALV confirmada.