Estudios previos en otras especies de mamíferos han demostrado que la estimulación del semen con luz roja aumenta la motilidad de los espermatozoides, la actividad mitocondrial y la capacidad de fertilización. Este estudio buscó determinar si la estimulación con luz roja utilizando un diodo emisor de luz (LED) a 620-630 nm afecta la motilidad de los espermatozoides y la estructura de las subpoblaciones móviles, la viabilidad de los espermatozoides, la actividad mitocondrial, los niveles intracelulares de ATP, la tasa de consumo de O y la integridad del ADN de los espermatozoides de caballo. Para este propósito, se recolectaron nueve eyaculados de nueve sementales adultos diferentes. Tras la recolección, el semen se diluyó en un extensor de Kenney, se analizó, se ajustó su concentración y finalmente se estimuló con luz roja. En todos los casos, el semen se empaquetó en pajillas transparentes de 0.5 mL, que se dividieron aleatoriamente en controles y 19 tratamientos de estimulación con luz; 6 consistieron en una sola exposición a luz roja, y los otros 13 involucraron irradiación con intervalos de irradiación y oscuridad (luz-oscuridad-luz). Después de la irradiación, se evaluó la motilidad de los espermatozoides utilizando un Sistema de Análisis de Semen Computarizado (CASA). Se utilizó citometría de flujo para evaluar la viabilidad de los espermatozoides, el potencial de membrana mitocondrial y la fragmentación del ADN. También se determinaron los niveles intracelulares de ATP y la tasa de consumo de O. Se encontraron patrones específicos de luz roja que modificaron los parámetros cinéticos (patrones: 4, 2-2-2, 3-3-3, 4-4-4, 5-1-5 y 5-5-5 min), la estructura de las subpoblaciones de espermatozoides móviles (patrones: 2, 2-2-2, 3-3-3 y 4-1-4 min), el potencial de membrana mitocondrial (patrones: 4, 3-3-3, 4-4-4, 5-1-5, 5-5-5, 15-5-15 y 15-15-15 min), los niveles intracelulares de ATP y la tasa de consumo de O (patrón: 4 min), sin afectar la viabilidad de los espermatozoides ni la integridad del ADN. Dado que el aumento en algunos parámetros cinemáticos fue concomitante con el de la actividad mitocondrial, los niveles intracelulares de ATP y la tasa de consumo de O, sugerimos que el efecto positivo de la irradiación con luz sobre la motilidad de los espermatozoides está relacionado con su impacto en la actividad mitocondrial. En conclusión, este estudio muestra que la luz LED roja estimula la motilidad y la actividad mitocondrial de los espermatozoides de caballo. Se necesita investigación adicional para abordar el impacto de la irradiación con luz roja en la capacidad de fertilización y los mecanismos a través de los cuales la luz ejerce sus efectos.