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Método optimizado de amplio espectro basado en PCR en tiempo real para el cribado bacteriano de concentrados de plaquetas.
La contaminación bacteriana de los componentes sanguíneos sigue siendo un reto importante en la medicina transfusional, en particular de los concentrados de plaquetas (CP), debido a las condiciones de almacenamiento que favorecen la proliferación bacteriana. En este estudio, desarrollamos un protocolo de PCR en tiempo real rápido, sensible y específico para el cribado bacteriano de CP. Se optimizó y validó un método de PCR en tiempo real con control interno utilizando nuestra mezcla maestra de PCR universal 16S (IBMP/Fiocruz), propiedad de la empresa, que actúa sobre una región conservada del gen del ARNr 16S bacteriano. El ADN de fondo inespecífico se eliminó por completo mediante el tratamiento de la mezcla maestra de PCR con monoazida de etidio (EMA). Se observó un límite inferior de detección para 10 equivalentes genómicos, con un valor de Ct de 34 ± 1,07 en la curva de calibración generada con diluciones seriadas de 10 veces de ADN de E. coli. El tiempo de procesamiento, incluida la purificación del ADN microbiano, fue de aproximadamente 4 horas. El método desarrollado mostró una alta sensibilidad sin amplificación inespecífica y un tiempo de detección menor que los métodos microbiológicos tradicionales, demostrando que es un medio eficiente para la detección de PC pretransfusionales.
Autores: Alexandrino, F.; Malgarin, J. S.; Krieger, M. A.; Morello, L. G.
Idioma: Inglés
Editor: Takako Matsumura-Tundisi
Año: 2021
Artículos
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Licencia
Atribución
Consultas: 8
Citaciones: Sin citaciones
Este documento es un artículo elaborado por Alexandrino, F., Malgarin, J. S., Krieger, M. A. y Morello, L. G. (Instituto de Biologia Molecular de Paraná y Fundación Oswaldo Cruz, Brasil) para Brazilian Journal of Biology Vol. 81, Num 3. Publicación de Instituto Internacional de Ecología. Contacto: bjb@bjb.com.br
La contaminación bacteriana de los componentes sanguíneos sigue siendo un reto importante en la medicina transfusional, en particular de los concentrados de plaquetas (CP), debido a las condiciones de almacenamiento que favorecen la proliferación bacteriana. En este estudio, desarrollamos un protocolo de PCR en tiempo real rápido, sensible y específico para el cribado bacteriano de CP. Se optimizó y validó un método de PCR en tiempo real con control interno utilizando nuestra mezcla maestra de PCR universal 16S (IBMP/Fiocruz), propiedad de la empresa, que actúa sobre una región conservada del gen del ARNr 16S bacteriano. El ADN de fondo inespecífico se eliminó por completo mediante el tratamiento de la mezcla maestra de PCR con monoazida de etidio (EMA). Se observó un límite inferior de detección para 10 equivalentes genómicos, con un valor de Ct de 34 ± 1,07 en la curva de calibración generada con diluciones seriadas de 10 veces de ADN de E. coli. El tiempo de procesamiento, incluida la purificación del ADN microbiano, fue de aproximadamente 4 horas. El método desarrollado mostró una alta sensibilidad sin amplificación inespecífica y un tiempo de detección menor que los métodos microbiológicos tradicionales, demostrando que es un medio eficiente para la detección de PC pretransfusionales.
Descripción
La contaminación bacteriana de los componentes sanguíneos sigue siendo un reto importante en la medicina transfusional, en particular de los concentrados de plaquetas (CP), debido a las condiciones de almacenamiento que favorecen la proliferación bacteriana. En este estudio, desarrollamos un protocolo de PCR en tiempo real rápido, sensible y específico para el cribado bacteriano de CP. Se optimizó y validó un método de PCR en tiempo real con control interno utilizando nuestra mezcla maestra de PCR universal 16S (IBMP/Fiocruz), propiedad de la empresa, que actúa sobre una región conservada del gen del ARNr 16S bacteriano. El ADN de fondo inespecífico se eliminó por completo mediante el tratamiento de la mezcla maestra de PCR con monoazida de etidio (EMA). Se observó un límite inferior de detección para 10 equivalentes genómicos, con un valor de Ct de 34 ± 1,07 en la curva de calibración generada con diluciones seriadas de 10 veces de ADN de E. coli. El tiempo de procesamiento, incluida la purificación del ADN microbiano, fue de aproximadamente 4 horas. El método desarrollado mostró una alta sensibilidad sin amplificación inespecífica y un tiempo de detección menor que los métodos microbiológicos tradicionales, demostrando que es un medio eficiente para la detección de PC pretransfusionales.