El algodón de tierras altas es un cultivo importante de fibra y semillas oleaginosas. Las semillas de algodón producen aproximadamente el 15% del valor en puerta de granja en la producción de algodón. Por lo tanto, la mejora del aceite de semilla de algodón puede aumentar significativamente el retorno económico de la producción de algodón con el mismo uso de tierra e inversión. Sin embargo, la variación genética en el aceite de semilla de algodón es muy limitada dentro del algodón de tierras altas, lo que limita el avance genético en el aceite de semilla de algodón. La cría por introgressión puede aliviar este efecto de cuello de botella al introducir genes deseables de Pima al algodón de tierras altas. El objetivo de este estudio fue evaluar líneas de introgressión (ILs) para un mejor aceite de semilla de algodón. Una población de 590 ILs, desarrollada a partir de un cruce entre Acala 1517-99 y Pima, se cultivó en Las Cruces, NM en 2022, que se utilizó para el análisis de ésteres metílicos de ácidos grasos a través de cromatografía de gases. Hubo un alto nivel de variación en el aceite de semilla de algodón y ácidos grasos. En el biplot, el aceite de semilla de algodón se correlacionó positivamente con el ácido oleico y se relacionó negativamente con el ácido palmítico. El análisis de clúster identificó un grupo de ILs con el promedio más alto de aceite y ácido oleico. Como resultado, se identificaron ILs con mejores perfiles de aceite para pruebas y análisis adicionales hacia el desarrollo de variedades de algodón de alta calidad con mayor y mejor aceite.