Los péptidos de colágeno desempeñan un papel crucial en la promoción de la elasticidad de la piel y el fortalecimiento de la salud de las articulaciones, con funciones potenciales por explorar. La hidrólisis enzimática es crucial para el peso molecular y la secuencia de péptidos, lo que influye en la bioactividad. En este estudio, se comparó la actividad inhibidora de la enzima convertidora de angiotensina (ECA) y la actividad de proliferación de fibroblastos de péptidos de diferentes pesos moleculares derivados de hidrólisis enzimática dual o triple. Se utilizó la filtración por membrana de ultrafiltración para separar los péptidos de colágeno preparados hidrolizados en dos componentes basados en el tamaño molecular. Los resultados mostraron que la fracción de péptidos de bajo peso molecular que contenía péptidos con P en el extremo C-terminal, como KP, RP y POGP, exhibieron una alta actividad inhibidora de ECA. La fracción de péptidos de bajo peso molecular obtenida a través de la hidrólisis enzimática triple que incorporaba proteasa de jengibre mostró la mayor actividad inhibidora de ECA, con un IC50 de 3.1 mg/mL. Además, los péptidos de colágeno hidrolizados por triple enzima que pasaron a través de membranas mostraron tasas de migración más altas y capacidades mejoradas de síntesis de colágeno, conteniendo secuencias de péptidos como POGP, POGA y LPO, potencialmente promoviendo la proliferación de fibroblastos. Los resultados proporcionarían orientación práctica para la producción de péptidos de colágeno con alta actividad inhibidora de ECA y actividad de proliferación de fibroblastos, en términos de procesamiento enzimático y separación de péptidos altamente activos.