Se ha desarrollado y validado un método rápido y eficaz para determinar la progesterona en plasma de conejo mediante un procedimiento de preparación de muestras basado en QuEChERS y un análisis de cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS). El analito se extrajo del plasma mediante acetonitrilo con partición de fase mediante una mezcla de sulfato de magnesio y cloruro de sodio. A continuación, el sobrenadante se inyectó directamente en LC-MS/MS en modo de ionización por electrospray positivo y se cuantificó utilizando progesterona-d9 como patrón interno. La linealidad del método osciló entre 1 ng/mL (LOQ) y 200 ng/mL. La recuperación del método fue del 86,0% al 103%, y la repetibilidad fue inferior al 5,5%. La muestra de plasma fue estable durante 12 semanas almacenada a 18 ± 2°C. Este método se aplicó para cuantificar la progesterona en plasma de conejo en un estudio farmacocinético de dos formulaciones transdérmicas: un fármaco de referencia y un sistema eutéctico-hidrogel. Los datos indican que la biodisponibilidad del sistema eutéctico-hidrogel fue 1,5 veces mejor que la del fármaco de referencia, y el sistema transdérmico es un potencial sistema de administración de fármacos para la progesterona.