La infección por el virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV) es una enfermedad diarreica aguda importante en cerdos que resulta en pérdidas económicas e industriales en todo el mundo. Las manifestaciones clínicas en lechones infectados son diarrea severa, deshidratación con indigestión de cuajada de leche, lo que lleva a la muerte. El diagnóstico de PEDV es esencial para monitorear y gestionar la enfermedad. El PEDV puede ser detectado e identificado mediante serología y el ácido nucleico del virus en muestras clínicas. Por lo tanto, se desarrolló una nueva técnica de amplificación y detección isotérmica, la amplificación de polimerasa por transcripción inversa-recombinasa acoplada a flujo lateral de ácido nucleico (RT-RPA-NALF) para la detección rápida de PEDV. La reacción en cadena de la polimerasa por transcripción inversa cualitativa (RT-qPCR) se estableció como el ensayo estándar de oro para comparar resultados. Se diseñaron pares de cebadores y sondas específicos, y se optimizaron las condiciones de RT-RPA para amplificar el gen M de PEDV. El ensayo establecido RT-RPA-NALF podría completarse en 25 minutos a una temperatura de 42 grados C y el amplicón se interpretó mediante detección visual. El ensayo RT-RPA-NALF desarrollado fue específico para el gen M de PEDV, no detectó otros patógenos comunes de diarrea porcina y mostró una detección mínima a 10 TCID/mL de PEDV. El ensayo RT-RPA-NALF puede detectar PEDV en 5 muestras fecales simuladas. Además, en 60 muestras fecales clínicas, los resultados de RT-RPA-NALF se correlacionaron con el ensayo RT-qPCR, que proporciona una sensibilidad del 95.65% y una especificidad del 100%, con una tasa de coincidencia del 98.33%. El rápido RT-RPA-NALF es simple y rápido, aumenta la alta sensibilidad y puede ser utilizado en el campo.